The investigation of chicken anemia virus and its antibody existence in commercial broiler and broiler breeder flocks

Ankara Üniv Vet Fak Derg, 58, 247-253, 2011 Broyler damızlık ve ticari broyler sürülerinde tavuk anemi virüsünün ve antikor varlığının araştırılması* Şinasi AŞKAR1, Murat YILDIRIM1 1 Kırıkkale Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Kırıkkale, Türkiye. Özet: Bu çalışmada, tavuk anemi hastalığına (chicken infectious anemia-CIA) karşı aşılı ve aşısız broyler damızlık sürülerinde tavuk anemi virüs (chicken anemia virus-CAV) antikor varlığını ve bu damızlıkların ticari broyler sürülerinde CAV maternal antikor seyrini, antikor ve VP1 ile VP2 gen varlığını araştırmak amaçlandı. Çalışmada enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ile polymerase chain reaction (PCR) testleri kullanıldı. Haziran 2008- Şubat 2009 tarihleri arasında CIA hastalığına karşı 6’sı aşılı, 6’sı aşısız broyler damızlık sürülerinden toplam 218 kan serumu ve bu damızlıkların 32 ticari broyler sürüsünden belirli aralıklarla toplam 2074 kan serumu ve 1916 doku örneği elde edildi. Aşılı ve aşısız damızlıklar seropozitif saptanırken, ortalama antikor titreleri karşılaştırıldığında istatistikî olarak önemli bir fark olmadığı belirlendi. Aşılı ve aşısız damızlıkların günlük ve 1 haftalık ticari broyler sürülerinde maternal antikor oranının % 98 - 100, 2 haftalıkken % 5 – 60, 3 haftalıkken % 0 - 15 arasında olduğu belirlendi. Aşılı damızlıkların 4 haftalık 8 ticari broyler sürüsünün % 62.5’inde, 5 haftalık 16 ticari broyler sürüsünün % 93.8’inde CAV antikor varlığı belirlendi. Aşılı damızlıkların 3 haftalık 8 ticari broyler sürüsünün % 25’inde, 4 haftalık 8 ticari broyler sürüsünün % 37.5’inde, 5 haftalık 16 ticari broyler sürüsünün % 37.5’inde VP1 ve VP2 gen varlığı belirlendi. Aşısız broyler damızlıkların ticari broyler sürülerinde ise CAV antikor ve VP1 ile VP2 gen varlığı tespit edilmedi. Anahtar sözcükler: Antikor, broyler, PCR, tavuk anemi virüs The investigation of chicken anemia virus and its antibody existence in commercial broiler and broiler breeder flocks Summary: The goals of this study were to investigate the antibody existence of chicken anemia virus (CAV) in vaccinated and non-vaccinated broiler breeder flocks and to monitor the course of CAV maternal antibody, to investigate the existence of antiCAV antibody, CAV VP1 and VP2 genes in commercial broiler flocks which were the progenies of broiler breeder flocks. Enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) and polymerase chain reaction (PCR) were used in the study. Between June 2008 and February 2009, 218 blood serum samples were obtained from 6 vaccinated and 6 non-vaccinated broiler breeder flocks with different ages. A total of 2074 serum and 1916 tissues samples were also obtained from 32 commercial broiler flocks. The vaccinated and nonvaccinated broiler breeder flocks were CAV seropositive and mean antibody titers of vaccinated and non-vaccinated broiler breeder flocks were not statistically different. In commercial broiler flocks, the rates of maternal antibodies were detected between 98 – 100 % , 5 – 60 %, and 0 – 15 % in flocks with a day and a week old, with two weeks old, and with three weeks old, respectively. The anti-CAV antibody existence were detected at the rate of 62.5 and 93.8 % in 8 commercial broiler flocks with four weeks old and 16 commercial broiler flocks with five weeks old of vaccinated broiler breeder flocks, respectively. CAV VP1 and VP2 genes were detected in 25 % of three weeks old, 37.5 % four weeks old flocks of 8 commercial broilers and in 37.5 % of five weeks old flocks of 16 commercial broilers of vaccinated broiler breeder flocks. However, no CAV antibody, CAV VP1 and VP2 genes were detected in 8 commercial broiler flocks of non-vaccinated broiler breeder flocks. Key words: Antibody, broiler, chicken anemia virus, PCR Giriş Tavuk anemi hastalığı (chicken infectious anemiaCIA), tavuk anemi virüsünün (chicken anemia virusCAV) neden olduğu immünosupresif viral bir hastalıktır. Hastalık aşı bağışıklığını olumsuz etkilemesi, subklinik seyretmesi, virüsün vertikal ve horizontal yolla bulaşması, dezenfeksiyona dirençli olması ve 6 haftalıktan önce * uygulanacak ticari aşının olmaması nedeniyle önemlidir (21). Tavuk anemi virüs Circoviridae familyasının Gyrovirus genusunda yer alan, tek iplikli DNA genomuna sahip, zarfsız bir virüstür. Virüs VP1, VP2 ve VP3 olarak isimlendirilen 3 viral proteine (VP) sahiptir (5). Gen sekansı belirlenen izolatlardan CAA 82-2 hariç hepsi VP1, VP2 ve VP3 proteinleri için 3 parçalı üst üste Birinci yazarın doktora tezinden özetlenmiştir. Bu tez Kırıkkale Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Kordinasyon Birimi (Proje No: 2007/1) tarafından desteklenmiştir. Şinasi Aşkar - Murat Yıldırım 248 binmiş açık okuma alanı (Open Reading Frame-ORF) kod parçalarına sahiptir. ORF 1 (pozisyon 853-2200nt), VP1 (51.6kDa, 499AA) yapısal kapsid proteinini kodlar, ORF2 (pozisyon 380-1028 nt) kapsid oluşumu ile ilişkili olan VP2 (24kDa, 216AA) proteinini kodlar, ORF3 (pozisyon 486-849nt) yapısal olmayan VP3 (13.6kDa, 121 AA) proteinini kodlar (12, 15, 19). Noteborn ve ark. (14) apoptin olarak da isimlendirilen VP3 proteinin tavuk timositlerinde ve lenfoblastoid hücre hatlarında güçlü bir apoptozis uyarıcısı olduğunu saptamışlardır. Tavuk sürülerinde CIA hastalığının araştırılmasında enzyme linked immuno sorbent assay (ELISA) ile polymerase chain reaction (PCR) testi sıklıkla kullanılmaktadır (21, 23). Önceki araştırmalarda PCR testi için farklı hedef gen dizileri seçilmişse de, genellikle CAV’nin Cuxhaven-1 izolatının ORF1 ve ORF3 gen dizileri primer seçim bölgesi olarak tercih edilmiştir. Fakat bu primerlerin tüm izolatların PCR ile teşhisinde yeterli olmayacağı bildirilmiştir (9, 13, 21). Bu çalışmada, CIA hastalığına karşı aşılı ve aşısız farklı yaşlardaki broyler damızlık sürülerinde CAV antikor varlığının, damızlık yaşının damızlıklardaki antikor titresi ve civcivlere aktarılan maternal antikor titresi üzerine etkisinin, ayrıca ticari broyler sürülerinde maternal antikor seyri ile antikor ve CAV DNA varlığının araştırılması amaçlandı. Materyal ve Metot Örneklerin toplanması: Araştırma Haziran 2008 ve Şubat 2009 tarihleri arasında Marmara bölgesindeki CIA hastalığına karşı CAV 26P4 suşu ile aşılı ve İç Anadolu bölgesindeki aşısız broyler damızlık sürüleri ve bu damızlıklardan elde edilen ticari broyler sürülerinde yapıldı. Marmara bölgesindeki aşılı 6 broyler damızlık sürüden (27, 32, 35, 45, 47, 54 haftalık) 120 adet kan serumu elde edildi. Bu damızlıkların her birine ait 4 ticari broyler sürüden (toplam 24 sürü, sürü no: A1-A24) belirli aralıklarla (günlük, 1, 2, 3, 4 ve 5 haftalıkken) alınan örneklerle, 1432 adet kan serumu ve 1376 adet doku örneği (344 timus, 344 karaciğer, 344 dalak, 344 kemik iliği) elde edildi. İç Anadolu bölgesindeki aşısız 6 damızlık sürüden (31, 35, 38, 40, 42 ve 60 haftalık) 98 adet kan serumu elde edildi. 40 ve 60 haftalık damızlıkların her birine ait 4 ticari broyler sürüden (toplam 8 sürü, sürü no B1-B8) günlük, 2, 3 ve 5 haftalıkken alın (...truncated)