Variabilidade genética de isolados do cogumelo Agaricus blazei por meio de marcadores RAPD

1242 COMUNICAÇÃO TOMIZAWA, M. M. et al. VARIABILIDADE GENÉTICA DE ISOLADOS DO COGUMELO Agaricus blazei POR MEIO DE MARCADORES RAPD1 Genetic variability of mushroom isolates Agaricus blazei using markers rapd Márcia Mayumi Tomizawa2, Eustáquio Souza Dias3, Leandro José de Assis4, Plínio Henrique Oliveira Gomide5, João Bosco dos Santos6 RESUMO Agaricus blazei (Murrill) ss. Heinem. é um cogumelo nativo do Brasil que vem despertando a atenção de vários pesquisadores em todo o mundo, devido às suas propriedades farmacológicas e nutricionais. Este trabalho teve por objetivo, analisar a variabilidade genética de alguns isolados utilizados comercialmente, por meio de marcadores RAPD. Foram analisados nove isolados de A. blazei, provenientes de diferentes regiões do Brasil e, como controle, dois isolados de A. bisporus. Todos eles fazem parte da coleção de fungos do Laboratório de Cogumelos Comestíveis e Medicinais do DBI/UFLA. Diferentes primers aleatórios foram utilizados, gerando um total de 139 bandas polimórficas. Procedeu-se a avaliação de similaridade genética entre os isolados pelo coeficiente de Dice e análise de agrupamento pelo método UPGMA. Os resultados revelaram que dos 9 isolados de A. blazei, 6 (CS1, CS3, CS4, CS6, CS8 e CS9) apresentaram uma alta similaridade genética, sendo considerados isolados de uma mesma origem ou clones. O isolado CS2 foi o que apresentou a maior divergência genética em relação aos demais, seguido dos isolados CS5 e CS7, os quais formaram cada um, um grupo a parte, com médias de 60,6%, 88,7% e 91,3% de similaridade genética, respectivamente. Termos para indexação: Variabilidade, RAPD, Cogumelo, Agaricus blazei. ABSTRACT Agaricus blazei (Murrill) ss. Heinem. is a Brazilian native mushroom which has called the attention of several researchers all over the world due to its nutritional and pharmacological properties. The objective of this study was to evaluate the genetic variability of some isolates commercially used, using RAPD markers. Nine isolates of A. blazei were analyzed, from different regions in the country, and two isolates of the A. bisporus, which served as control group. All of them are part of the collection of mushroom of the Edible and Medicinal Mushroom Laboratory of DBI/UFLA. For RAPD analysis, different random primers were used, generating 139 polymorphic bands. The genetic similarity evaluation was proceeded between the isolates by means of Dice coefficient and grouping analysis through the UPGMA method. The results showed that from the 9 isolates of A. blazei, 6 (CS1, CS3, CS4, CS6, CS8 e CS9) have shown a high genetic similarity and these were considered isolates of the same origin or clones. The CS2 was the isolate which showed the higher genetic divergence in relation to the others, followed by the CS5 and CS7, with averages of 60.6%, 88.7% and 91.3% genetic similarity, respectively. Index terms: Variability, RAPD, Mushroom, Agaricus blazei. (Recebido em 29 de agosto de 2005 e aprovado em 31 de maio de 2006) Agaricus blazei (Murrill) ss. Heinemann é um cogumelo nativo do Brasil que se tornou mundialmente conhecido devido às suas propriedades farmacológicas e nutricionais. No Brasil, a espécie ficou conhecida popularmente como cogumelo do sol , pelo fato de crescer em campo aberto, sendo conhecido também como cogumelo piedade, cogumelo medicinal, cogumelo princesa, cogumelo-de-Deus, cogumelo da vida, cogumelo dos 1 deuses (MIZUNO, 1995) e, mais recentemente, Champignon do Brasil (AMAZONAS, 2004). No Japão, ele é conhecido como himematsutake ou kawariharatake (MIZUNO, 1995) e nos Estados Unidos, como royal agaricus, royal sun agaricus ou almond portobello. O Brasil se destaca como o maior produtor mundial de A. blazei, por ser uma espécie nativa, apresentando as condições climáticas favoráveis para o seu cultivo. Extraído da Dissertação de Mestrado da primeira autora Universidade Federal de Lavras/UFLA Programa de Pós-graduação em Microbiologia Agrícola. Msc, Engenheira Agrônoma pela Universidade Federal de Lavras/UFLA 3 Engenheiro Agrônomo, Dr. Professor do Departamento de Biologia da Universidade Federal de Lavras/UFLA Cx. P. 3037 37200-000 Lavras, MG 4 Graduando em Ciências Biológicas na Universidade Federal de Lavras/UFLA, Cx. P. 3037 37200-000 Lavras, MG 5 Graduando em Agronomia na Universidade Federal de Lavras/UFLA Cx. P. 3037 37200-000 Lavras, MG Bolsista de Iniciação Científica PBIICT/FAPEMIG 6 Engenheiro Agrônomo, Dr. Professor do Departamento de Biologia da Universidade Federal de Lavras/UFLA Cx. P. 3037 37200-000 Lavras, MG Ciênc. agrotec., Lavras, v. 31, n. 4, p. 1242-1249, jul./ago., 2007 2 Variabilidade genética de isolados do cogumelo Agaricus blazei... A produção nacional atinge por ano 40 toneladas de cogumelo desidratado, sendo 95% da produção destinado à exportação para o mercado japonês. Devido ao seu elevado preço no mercado internacional muitas empresas e produtores rurais passaram a buscar nesse cogumelo, uma nova alternativa de renda. Várias empresas ou cooperativas têm comercializado o inóculo ( semente ou spawn) de A. blazei ou o próprio composto colonizado. No entanto, pouco se sabe a respeito da origem e da variabilidade genética dos isolados utilizados para a produção comercial de inóculo. Visto que alguns produtores enfrentam problemas no cultivo desse cogumelo, é de fundamental importância que, além dos aspectos tecnológicos de produção, haja um estudo para avaliar se os diferentes isolados utilizados atualmente no mercado apresentam um mesmo padrão genético, o que será importante para que o produtor tenha a segurança de que está adquirindo um material com inóculo de boa qualidade. Além de permitir uma comparação entre os diferentes isolados, o uso de marcadores moleculares poderá ser importante futuramente para se fazer uma correlação entre os mesmos e alguns parâmetros importantes relacionados às propriedades farmacológicas dos cogumelos como atividade antitumoral, antimutagênica e bactericida. Este trabalho teve como objetivo, analisar a variabilidade genética de isolados do cogumelo A. blazei, provenientes de diferentes regiões do País, por meio de marcadores RAPD. TABELA 1 1243 Foram utilizados nove isolados de Agaricus blazei (CS1, CS2, CS3, CS4, CS5, CS6, CS7, CS8 e CS9) obtidos a partir de inoculantes ( sementes ) de diferentes fontes comerciais, de cogumelos obtidos de produtores e também de cogumelos colhidos na região de origem no interior do Estado de São Paulo. Foram também utilizadas duas diferentes linhagens do cogumelo Agaricus bisporus ( Champignon de Paris CHP e Portobello PB), que serviram como controle durante as análises moleculares. Todos estes isolados fazem parte da coleção de fungos do Laboratório de Cogumelos Comestíveis e Medicinais do Departamento de Biologia da UFLA e se encontram listados na Tabela 1. Os isolados CS4, CS5 e CS7, correspondem, respectivamente, aos isolados ABL 97/11, ABL 99/25 e ABL 99/29 da coleção de cogumelos da UNESP/FCA de (...truncated)