Development and validation of the method for determination of related impurities in riboxin tablets

ISSN 2308-8303 Journal of Organic and Pharmaceutical Chemistry. – 2015. – Vol. 13, Iss. 4 (52) UDC 615.22:615.453.6:543.544.5.068.7:543.05 DEVELOPMENT AND VALIDATION OF THE METHOD FOR DETERMINATION OF RELATED IMPURITIES IN RIBOXIN TABLETS M.V.Rosada, N.Yu.Bevz, V.A.Georgiyants National University of Pharmacy 53, Pushkinska Str., 61002, Kharkiv. E-mail: Key words: standardization; Riboxin; tablets; related impurities; HPLC Riboxin (inosine) is used in medicine for treating cardiovascular diseases, so the number of dosage forms containing this substance as an active ingredient is constantly increasing at the Ukrainian pharmaceutical market. When developing quality control methods for a dosage form containing one active substance it is advisable to carry out tests on the presence of related impurities besides identification and assay tests. The article presents the data concerning development of the method for determination of related impurities (hypoxanthine, guanosine) in riboxine tablets using HPLC. The analysis was carried out using a HPLC column (125×4 mm i.d., 5 μm particles) filled with “Lichrospher 60 RP select B”sorbent. The mobile phase adjusted with the phosphate buffer to pH 3.5 was used. The UV detection was performed at 250 nm. The validation characteristics have been studied using the acceptance criteria for the tolerances of the content not more than 0.5% for each impurity, and they confirm specificity (the absence of the effect of excipients), linearity, precision (convergence), accuracy (Δz = 0.79≤max Δz = 5.0, δ = 0.21≤max δ = 0.26, a = 0.48, r = 0.99997>0.9976 for hypoxanthine, and Δz = 0.83≤max Δz = 5.0, δ = 0.17≤max δ = 0.28, a = 0.21, r = 0.99997>0.9976 for guanosine), and the application range for the method proposed. РОЗРОБКА ТА ВАЛІДАЦІЯ МЕТОДИКИ ВИЗНАЧЕННЯ СУПРОВІДНИХ ДОМІШОК У ТАБЛЕТКАХ РИБОКСИН М.В.Росада, Н.Ю.Бевз, В.А.Георгіянц Ключові слова: стандартизація; рибоксин; таблетки; супровідні домішки; метод ВЕРХ Рибоксин (інозин) застосовують у медичній практиці для лікування серцево-судинних захворювань, тому кількість готових лікарських форм, що містять як активний фармацевтичний інгредієнт саме цю речовину, на фармацевтичному ринку України постійно зростає. При розробці методик контролю якості на готову лікарську форму, що містить одну діючу речовину, доцільно окрім випробувань на ідентифікацію та кількісне визначення також проводити випробування на вміст супутніх домішок. У запропонованій роботі наводяться дані по розробці методики визначення супровідних домішок (гіпоксантин, гуанозин) рибоксину в таблетках з використанням методу високоефективної рідинної хроматографії. Визначення проводили на колонці розміром 125×4 мм, заповненій сорбентом «Lichrospher 60 RP select B» з розміром часток 5 мкм, використовували рухому фазу на основі фосфатного буферного розчину з рН 3,5 та УФ-детектування за довжини хвилі 250 нм. Вивчені валідаційні характеристики з використанням критеріїв прийнятності для допусків вмісту не більше 0,5% для кожної з домішок підтверджують специфічність (відсутність впливу допоміжних речовин), лінійність, прецизійність (збіжність), правильність (Δz = 0.79≤max Δz = 5.0, δ = 0.21≤max δ = 0.26, a = 0.48, r = 0.99997>0.9976 гіпоксантину та Δz = 0.83≤max Δz = 5.0, δ = 0.17≤max δ = 0.28, a = 0.21, r = 0.99997>0.9976 гуанозину) та діапазон застосування запропонованої методики. РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОПУТСТВУЮЩИХ ПРИМЕСЕЙ В ТАБЛЕТКАХ РИБОКСИН Н.В.Росада, Н.Ю.Бевз, В.А.Георгиянц Ключевые слова: стандартизация; рибоксин; таблетки; сопутствующие примеси; метод ВЭЖХ Рибоксин (инозин) применяют в медицинской практике для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, поэтому количество готовых лекарственных форм, содержащих в качестве активного фармацевтического ингредиента именно это вещество, на фармацевтическом рынке Украины постоянно растет. При разработке методик контроля качества на готовую лекарственную форму, содержащую одно действующее вещество, целесообразно кроме испытаний на идентификацию и количественное определение также проводить испытания на содержание сопутствующих примесей. В предлагаемой работе приводятся данные по разработке методики определения сопутствующих примесей (гипоксантин, гуанозин) рибоксина в таблетках с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определение проводили на колонке размером 125×4 мм, заполненной сорбентом «Lichrospher 60 RP select B» с размером частиц 5 мкм, использовали подвижную фазу на основе фосфатного буферного раствора с рН 3,5 и УФ-детектирование при длине волны 250 нм. Изученные валидационные характеристики с использованием критериев приемлемости для допусков содержания не более 0,5% для каждой из примесей подтверждают специфичность (отсутствие влияния вспомогательных веществ), линейность, прецизионность (сходимость), правильность (Δz = 0.79≤max Δz = 5.0, δ = 0.21≤max δ = 0.26, a = 0.48, r = 0.99997 гипоксантина и Δz = 0.83≤max Δz = 5.0, δ = 0.17≤max δ = 0.28, a = 0.21, r = 0.99997 гуанозина) и диапазон применения предлагаемой методики. 62 Журнал органічної та фармацевтичної хімії. – 2015. – Т. 13, вип. 4 (52) ISSN 2308-8303 Riboxin is used for improvement of the functional recovery after craniocerebral traumas; it affects restoration of the level of the associated protein GAP-43 growth in the hippocampus [1], and has good indications for treating patients suffered a stroke [2]. Recently, a lot of dosage forms containing riboxin appear at the domestic pharmaceutical market. The State Pharmacopoeia of Ukraine (SPhU) recommends to determine related impurities both in dosage forms and in substances. The inosine substance is obtained by microbiological synthesis, and hypoxanthine and guanosine can be by-products of this synthesis [3]. Their certain amount (not more than 0.5%) is regulated in the substance [4, 5, 6]. For the further substantiation for either inclusion or exclusion of impurities in the specification it is advisable to determine these related impurities in the finished dosage form. Nowadays, there are three requirements for drug substances and medicines: efficacy, safety, and quality. Recently, in drug quality control the attention is paid to determination of related impurities [7, 8, 9], which may have a significant impact on the human health due to potential teratogenic, mutagenic or carcinogenic effects. Therefore, control and monitoring of impurities is a pressing question when developing and producing drugs. In accordance with the Pharmacopoeia of the People’s Republic of China [5], the manufacturer [4] and the State Pharmacopoeia of the Russian Federation [6] the HPLC method is used for the assay of riboxin and determination of related impurities. The equipment change and technological peculiarities of tablet production need improvement of the existing method or development of the new one. The aim of our research was to develop the method for determination of related impurities in riboxin tablets by HPLC, and validate it in (...truncated)